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細菌內毒素分析

更新時間:2012-10-30 點擊量:2524

 氣相色譜(Gc)和質譜(MS)聯用法是20世紀出現的一種內毒素檢測方法。此法主要依據細菌內毒素的主要毒性部分類脂A水解時產生一種3一羥基脂肪酸的物質。這種物質是內毒素所*的,并不存在于其他自然界的物質當中。每分子的類脂A含有4mol的3一羥基脂肪酸,類脂A的平均分子量為8000。通過對這種特異性3一羥基脂肪酸的檢測,可以定量檢測內毒素的含量。由于儀器的限制,氣質聯用的方法很難成為常規的細菌內毒素檢測方法。《中國藥典》細菌內毒素檢查法是利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素,以判斷供試品中細菌內毒素的*是否符合規定的一種方法。細菌內毒素檢查包括兩種方法,即凝膠法和光度測定法,后者包括濁度法和顯色基質法。


一、家兔檢測法

1923年首先提出用家兔檢測熱原方法,1942年美國藥典將家兔法作為藥品的熱原檢查,為保障藥品質量和用藥安全發揮了重要作用。

目前,對于熱原的概念國內外仍未有*統一的認識。綜合國內外文獻報道,普遍認為熱原的本質就是細菌內毒素的脂多糖。wHO文件中同樣提到,藥品中的熱原就是指細菌內毒素,至少在藥檢范圍內控制內毒素就是控制熱原。嚴格地講,不是每一種熱原都具有脂多糖(1ipoplysaccharide,LPs)的結構,在藥品生產質量管理規范條件下,藥品生產的質量控制一般可以接受的觀點是:不存在細菌內毒素意味著不存在熱原。多年來研究表明,熱原進人人體血液循環系統后,并不直接引起發熱和其他毒性反應,但它可使細胞釋放內源性熱原物質。

這種內源性熱原可直接作用于中樞神經系統,刺激體溫中樞,引起機體發熱。作為熱原檢測法的家兔檢測法也就成為人們檢測內毒素的zui早方法。此方法將一定量的被檢標本靜脈注入家兔體內,觀察其注射后的發熱情況,以決定所檢標本中有無熱源存在。家兔檢測法為一種定性檢測內毒素的方法,應用歷史較久。但隨著社會的進步、科技的發展,制藥工業飛速前進,新藥品種不斷增加,臨床用藥要求越來越高,家兔法局限性日益突出,如家兔對內毒素在反應上有個體差異,敏感度不高,不能定量檢測內毒素等,因此家兔檢測法現在已經很少使用。

二、氣相色譜和質譜聯用檢測方法

氣相色譜(Gc)和質譜(MS)聯用法是20世紀出現的一種內毒素檢測方法。此法主要依據細菌內毒素的主要毒性部分類脂A水解時產生一種3一羥基脂肪酸的物質。這種物質是內毒素所*的,并不存在于其他自然界的物質當中。每分子的類脂A含有4mol的3一羥基脂肪酸,類脂A的平均分子量為8000。通過對這種特異性3一羥基脂肪酸的檢測,可以定量檢測內毒素的含量。由于儀器的限制,氣質聯用的方法很難成為常規的細菌內毒素檢測方法。

三、《中國藥典》(2005年版)細菌內毒素檢查法

本法是利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素,以判斷供試品中細菌內毒素的*是否符合規定的一種方法。細菌內毒素檢查包括兩種方法,即凝膠法和光度測定法,后者包括濁度法和顯色基質法。供試品檢測時,可使用其中任何一種方法進行試驗。當測定結果有爭議時,除另有規定外,以凝膠法的結果為準。凝膠法是通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來檢測或半定量內毒素的方法。

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