技術(shù)部李工為您親自總結(jié)elisa測定中常見問題及解決辦法

如果您想了解ELISA中常見問題以及解決方法，請您耐心的仔細(xì)閱讀我們的這篇文章。此常見問題由我司技術(shù)部李工為您總結(jié)： 

     ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定的簡稱，是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。它以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合，由于抗原、抗體反應(yīng)在一種固相載體—ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定的簡稱，是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA以操作簡便、靈敏度較高、特異性較好等特點而在臨床上獲得廣泛應(yīng)用，尤其是各型病毒性肝炎感染標(biāo)志物的檢測。但其操作步驟較多，各個環(huán)節(jié)都可能對其檢測效果產(chǎn)生影響．所以有必要對于臨床操作中可能出現(xiàn)的問題及其解決辦法加以探討。  我們公司技術(shù)部經(jīng)過長期以來的檢測實驗，特將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：

    1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

    2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2） 加樣后及時放入孵箱。 3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5） 標(biāo)本較多時，請分批操作。

    3 孵育 可能原因： 1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2） 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。

    4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2） 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3） 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2） 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。

    5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流； 3） A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

    6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

    7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。 

       其實呢在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

       
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                                                                                      2013.9.23